PCR儀校準的項目有哪些？快來(lái)了解下吧

　　PCR儀校準是實(shí)驗中一定要去做的事情，一個(gè)穩定的溫度循環(huán)是成功實(shí)現PCR所必需的。其中溫度控制的動(dòng)、穩態(tài)特性是影響PCR擴增結果正確與否的重要因素之一, 這包括溫度準確性、升降溫速度、溫場(chǎng)均勻性、大超調溫度。

　　PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復制。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因復制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類(lèi)。

　　PCR儀校準的項目有以下幾點(diǎn)：

　　一、溫度準確性

　　溫度準確性是PCR儀重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚至是錯誤的擴增結果，造成假陽(yáng)性和假陰性。

　　市場(chǎng)上各家廠(chǎng)商考核基因擴增儀PCR儀性能的主要指標，一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進(jìn)行測試。校準實(shí)驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數量

　　二、溫場(chǎng)均勻性

　　由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標規定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現的溫度均勻度為±0.3℃。

　　校準實(shí)驗時(shí)，通過(guò)選取孔板中16個(gè)特殊反應位置來(lái)測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin  tmax =大溫度；tmin =小溫度

　　三、升降溫速率

　　PCR儀校準中擴增產(chǎn)物數量的多少決定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力大升溫速率達15~20℃。一個(gè)完整的PCR過(guò)程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個(gè)階段是必須要保證的。

　　因此，只有使升降溫的過(guò)程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過(guò)程所需時(shí)間。一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標規定升溫速率為±3℃/sec。儀器校準實(shí)驗時(shí)，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。

　　四、大超調溫度

　　當溫度從一定點(diǎn)溫度調節到另一定點(diǎn)溫度,就會(huì )產(chǎn)生溫度的超調。超調溫度過(guò)大同樣會(huì )對試驗產(chǎn)生影響，所以校準實(shí)驗時(shí)，需要計算大超調溫度和平均超調溫度。